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正文:

形態(tài)學(xué)的研究
由于細胞凋亡的過程在形態(tài)學(xué)上有一些特徵：細胞萎縮、細胞質(zhì)濃縮、染色質(zhì)
凝聚并黏附在核膜形成隆起和出現(xiàn)凋亡小體；細胞內(nèi)的粒線體、高爾基體沒有
腫脹現(xiàn)象；在相當長一段時間內(nèi)，核膜保持完整。這些細胞形態(tài)上的改變均可
利用電子顯微鏡的技術(shù)來觀察。
將數(shù)位影像技術(shù)與電子顯微鏡相結(jié)合，可定量分析灰階改變，從而測出細胞核
密度的細微變化；利用相位差顯微鏡可觀察到細胞膜出芽與凋亡小體；共軛焦
掃瞄顯微鏡對形態(tài)分析及大分子定位具有優(yōu)勢；使用穿透式和掃瞄式電子顯微
鏡則可觀察到凋亡細胞核的形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化例如染色質(zhì)皺縮、凋亡小體的形成
和凋亡細膜出芽等現(xiàn)象。
也可利用各種染色法來觀察到細胞凋亡細胞的各種形態(tài)學(xué)特徵。有些染料例如
臺盼藍(Trypan blue)為活細胞所排斥，但可使死細胞著色。DAPI(4,6-diamino-2-
phenylindole)是常用的一種與DNA結(jié)合的螢光染料。借助DAPI的染色，可觀察
到細胞核的形態(tài)變化。Giemsa染色法可以觀察到染色質(zhì)皺縮、皺邊、凋亡小體
形成等形態(tài)。利用碘化丙啶(Propidium iodide, PI)對細胞或細胞核染色后，即可
測出濃縮的染色質(zhì)及細胞核片段。有時也利用兩種染料進行複染，以便更可靠
地確定細胞凋亡的變化。例如用吖啶橙(Acridine orange, AO)和溴化乙錠

(Ethidium bromide, EtBr)進行複染，AO只進入活細胞，正常的細胞核及處于凋
亡早期的細胞核呈現(xiàn)綠色：EtBr只能進入死細胞，將死細胞及凋亡晚期細胞的
細胞核染成橙紅色。
DNA降解的分析
細胞凋亡中最重要的生化改變是細胞核內(nèi)DNA的斷裂，形成間隔180~200bp整數(shù)
倍的階梯狀電泳條帶(DNA ladder)。利用這一特性，將凋亡細胞核萃取物進行瓊
脂糖凝膠電泳，即可得到上述典型的改變。降解狀電泳條帶常被認為是細胞凋
亡的可靠指標。正常組織DNA沒有此降解，電泳條帶表現(xiàn)為一個大分子片段。
壞死細胞DNA斷裂的位點是隨機的，電泳后出現(xiàn)連續(xù)分布的彌散(Smear)條帶。
也有人利用DNA缺口處的游離3-OH末端，以磷32標記的脫氧核苷酸，在
Klenow聚合酶的作用下，進行標記，然后進行電泳和放射自顯影。這一技術(shù)的
缺點是費時，耗費細胞量多，且無法在異質(zhì)細胞群中區(qū)別凋亡細胞。
另外，也可利用慧星電泳法(Comet assay)來測定細胞凋亡的現(xiàn)象。慧星電泳法的
原理是將單個細胞懸浮于洋菜凝膠中，經(jīng)裂解處理后，再在電場中進行短時間
的電泳，并用螢光染料染色，凋亡細胞中形成的DNA分解片段，在電場中移動
速度較快，使細胞核呈現(xiàn)出一種慧星式的圖桉，而正常的無DNA斷裂的核在泳
動時保持圓球形，這是一種快速簡便的凋亡檢測法。
核酸內(nèi)切酶活性分析