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標(biāo)題:大多數(shù)酵母載體都是能穿梭于酵母和細菌之間

信息分類:站內(nèi)新聞   作者:yiyi發(fā)布   時間:2016-8-29 0:19:32 將本頁加入收藏

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正文:

大多數(shù)酵母載體都是能穿梭于酵母和細菌之間

    培養(yǎng)酵母菌既簡單、經(jīng)濟,又十分快捷,在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基
中,大約90min的時間即可增殖一代。

    支持酵母菌染色體功能的三種基本結(jié)構(gòu)元件已經(jīng)被確認(rèn)和克隆
,它們分別是復(fù)制起點(ARS元件)、著絲粒(CEN元件)和端粒(telom
ere,TEL)。已經(jīng)利用這些克隆化的元件構(gòu)建了酵母人工染色體,
并應(yīng)用于各種染色體行為的研究。利用這些結(jié)構(gòu)元件,再加上克隆
化的酵母菌選擇標(biāo)記與大腸桿菌載體融合構(gòu)建成穿梭載體,能分別
在大腸桿菌和酵母菌中自主復(fù)制并穩(wěn)定存在。

    大多數(shù)酵母載體都是能穿梭于酵母和細菌之間的穿梭載體。根
據(jù)不同用途,可分為克隆載體、表達載體、轉(zhuǎn)導(dǎo)載體和用于誘變的
載體。根據(jù)復(fù)制方式,酵母載體也可分為兩類。一類是整合載體,
這種載體在酵母中不能自我復(fù)制,只能通過同源重組整合到染色體
中而得以保存。這類載體的優(yōu)點是某個基因一旦被克隆和整合之后
,將隨染色體DNA而分離。因此該基因在細胞分裂時會更穩(wěn)定。另
一類載體(它包括酵母著絲點序列),一般在克隆時作為一個CEN/A
RS盒,這類載體同時具有自我復(fù)制能力并且在細胞分裂時較穩(wěn)定。
    酵母分子生物學(xué)研究中常常要分離質(zhì)粒和酵母染色體DNA,質(zhì)
粒DNA用來轉(zhuǎn)化大腸桿菌,而染色體DNA則用于Southern雜交分析、
PCR擴增和整合性質(zhì)的質(zhì)粒的克隆等。下面分別介紹酵母細胞質(zhì)粒D
NA和染色體DNA的分離方法。










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