標(biāo)題：在同一樣品中使用多種熒光染料實(shí)驗(yàn)顯微鏡
信息分類(lèi):站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-7-17 4:17:58
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正文:
為了在同一樣品中使用多種熒光染料;必須仔細(xì)確定每一
抗原只能被一種標(biāo)記試劑識(shí)別。最安全的方法就是使用被不同
熒光染料標(biāo)記的第一抗體。染色可以同時(shí)進(jìn)行，但是必須包括
進(jìn)行單獨(dú)染色的對(duì)照樣品以用于監(jiān)測(cè)交叉反應(yīng)。開(kāi)始最常遇見(jiàn)
的是第一抗體沒(méi)有被標(biāo)記;而只能通過(guò)間接法監(jiān)側(cè)。在這種悄
況下，抗體必須來(lái)源于不同的種、綱或亞綱，然后用被標(biāo)記的
第二抗體專(zhuān)一性的識(shí)別每一種第一抗體。通常要檢測(cè)試劑的專(zhuān)
一性，因?yàn)獒槍?duì)于某一種、綱或亞綱的抗體可能與大量的其他
種、綱或亞綱的抗體發(fā)生相互反應(yīng)，除非它們被專(zhuān)一地吸附
(多家廠(chǎng)商提供的、來(lái)源于其他物種并以固定化的血清蛋白預(yù)
吸附的第二抗體)。因此要盡可能使用來(lái)源于同一物種的第二
杭體。例如，當(dāng)使用一種兔多克隆抗體和一種小鼠的單克隆抗
體時(shí)，就應(yīng)當(dāng)使用產(chǎn)于山羊的血清為阻斷劑。另外一項(xiàng)重要的
對(duì)照實(shí)驗(yàn)是監(jiān)測(cè)檢測(cè)試劑的種間交又反應(yīng)，.即進(jìn)行每一種第一
抗體與專(zhuān)一性識(shí)別區(qū)域的第一抗體的第二抗體之間的每一免疫
染色實(shí)驗(yàn)。
為了減少交又反應(yīng)，多重染色也可以在固定步驟間連續(xù)進(jìn)
行。在涉及兩種抗體情況時(shí)，例如常常面臨來(lái)自同一類(lèi)型的兩
種小鼠單克隆抗體，則最好有一種直接標(biāo)記。為了避免可能出
現(xiàn)的第二標(biāo)記抗體與該標(biāo)記的第一抗體的結(jié)合，在連續(xù)染色
時(shí)，最后用標(biāo)記第一抗體染色的方法也是非常可取的。
總之，為了進(jìn)行多重標(biāo)記免疫染色實(shí)驗(yàn)，必須注意下而二
個(gè)垂要標(biāo)準(zhǔn):
①所選擇的熒光染料必須具有較好的光講分辨特性。
②為了避免相互識(shí)別，第二抗體必須來(lái)源于同一種宿主動(dòng)
物。它們也不能識(shí)別所用的其他第一抗體和在檢測(cè)中存在的其
他任何免疫球蛋白.而且他們也不能直接與樣品反應(yīng)。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
特別聲明：本文出自北京上光儀器有限公司-未經(jīng)允許請(qǐng)勿轉(zhuǎn)載，本文地址：http://www.bjsgyq.com/news/8646.html
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