標題：共聚焦顯微鏡在亞細胞熒光染色實驗中應(yīng)用
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-7-17 4:18:10
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正文:
鏈霉抗生物素蛋白一生物素一過氧化物酶法
免疫染色
為了防止切片干燥，整個染色過程應(yīng)在濕盒中進行。這里
描述的方案目的在于高靈敏度和省略復(fù)染，這樣可以檢測甚至
微弱的陽性反應(yīng)，并能提供足資保存的黑白照片，并可避免通
常用蘇木精核復(fù)染造成的干擾。
①復(fù)水后的冰凍切片或石蠟切片(后者需進行暴露抗原步
驟以應(yīng)必須)已可進行染色。為了阻斷一抗的非特異性結(jié)合，
用含有5％～20％正常血清(和二抗中所用同種動物的血清)
的溶液預(yù)處理切片(如在本例中用生物素化的抗體)室溫孵育
20分鐘。
②吸干切片上多余的封閉液。
③用對所研究周期蛋白質(zhì)特異的第一抗體孵育切片。一抗
可以是一種雜交瘤組織培養(yǎng)上清液，或多克隆或單克隆抗體
(純化的或腹水)。用加有載體蛋白(3％BSA或10％血清，最
好用與第一步中用于阻斷非特異結(jié)合的同種屬的血清)的PBS
適當?shù)叵♂屢豢埂？贵w合適的稀釋度與最適的孵育時間必須根
據(jù)預(yù)染色實驗確定，但一般對多克隆抗血清和腹水稀釋度在
基菲吮，碘化丙錠〕。可透過多種熒光的濾光裝置(用于觀測
多種熒光染料在進行基Vi定位時非常有用，因為用不161的濾光
器觀測標記熒光和逆染色可能產(chǎn)生記錄誤差，以及很難在染色
體的正確位置上標繪出熒光信號)。例如染色體以DA PI染色
時，一個可透過三種熒光的濾光器允許同時觀測德州紅和
FITC信號。雖然共聚焦顯微鏡在亞細胞熒光抗體染色實驗中
有用，但在FISH中并不適用，因為它的影像分辨率一般不如
標準的熒光，而且激光照明光源的強度足以迅速淬滅樣品。但
是在用FISH研究厚組織切片時可以充分利用共聚焦顯微鏡
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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