標(biāo)題：顯微鏡熒光光度計(jì)量的原理-主要的優(yōu)點(diǎn)有哪些
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2014-5-5 15:42:15
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正文:
顯微鏡熒光光度術(shù)(microfluorophotometry)又稱細(xì)胞熒光光度術(shù)(cyto
f luorophotometry)或定量熒光顯微術(shù)(quantitative fluorescence micro
scopy)。顯微鏡熒光光度是在光學(xué)顯微鏡的分辨水平上進(jìn)行熒光的定量和定
性分析。它的主要優(yōu)點(diǎn)是:在顯微鏡下測(cè)定低濃度的反應(yīng)產(chǎn)物，靈敏度比吸
收法高104次方。由于熒光物質(zhì)本身就是發(fā)射的光源，因此在測(cè)定不均一分
布的發(fā)色團(tuán)時(shí)，不存在分布誤差的問(wèn)題，所以測(cè)定方法簡(jiǎn)單;但由于存在熒
光消褪和熒光碎滅問(wèn)題，測(cè)量也存在些特殊問(wèn)題。
1.測(cè)定細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的含量:用熒光定量DNA, RNA、組蛋白、總蛋白
、精氨酸、賴氨酸、糖元和疏基，主要是利用特定的熒光染料與被測(cè)定物質(zhì)
進(jìn)行特異性的結(jié)合，并在一定的濃度范圍內(nèi)呈化學(xué)計(jì)量學(xué)關(guān)系，從而可根據(jù)
熒光強(qiáng)度來(lái)測(cè)定物質(zhì)的含量，
2.免疫熒光的定最測(cè)定:視覺(jué)半定盤(pán)的方法只有在熒光強(qiáng)度相差2倍時(shí)，
才能判斷出來(lái)，而利用細(xì)胞熒光光度計(jì)則能測(cè)出細(xì)微的熒光變化。
4.酶的動(dòng)力學(xué)研究:細(xì)胞熒光光度術(shù)特別適用于活細(xì)胞或沒(méi)有固定的組
織切片酶的動(dòng)力學(xué)研究，例如通過(guò)測(cè)定還原型輔酶I結(jié)合到蛋白質(zhì)的熒光變
化來(lái)分析氧化酶體系的變化。
5.微體積的顯微熒光光度測(cè)定:免疫化學(xué)和酶化學(xué)研究常需要測(cè)定包含
在微滴、微毛細(xì)管或人工基質(zhì)微球中微小體積的熒光反應(yīng)產(chǎn)物。細(xì)胞熒光光
度計(jì)能準(zhǔn)確的測(cè)定直徑為1-50微米大小“微池”中的熒光。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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