標(biāo)題：細(xì)胞繼代培養(yǎng)購(gòu)買(mǎi)什么顯微鏡比較好？

信息分類(lèi):站內(nèi)新聞　　 作者:yiyi發(fā)布　　 時(shí)間:2012-6-13 14:41:35 將本頁(yè)加入收藏

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正文:

細(xì)胞繼代培養(yǎng)購(gòu)買(mǎi)什么顯微鏡比較好？

回復(fù)：倒置生物顯微鏡

細(xì)胞繼代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

1.   附著型胞 (adherent cell)

（1）吸掉舊培養(yǎng)液。

（2）用D-PBS洗滌細(xì)胞一至二次。

（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37℃作用數(shù)分鐘，于倒立顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時(shí)，吸掉trypsin-EDTA溶液。﹙若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA作用后，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止trypsin作用，離心后再吸掉上清液。﹚

（4）輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

2. 懸浮型細(xì)胞 (suspension cell)

（1）吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000 rpm 5分鐘。

（2）吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

3.融合瘤﹙hybridoma﹚

（1）有些hybridoma cell需培養(yǎng)三天以上才會(huì)產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基，則可能會(huì)失去抗體。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養(yǎng)瓶中。

※注意事項(xiàng)

● 細(xì)胞生長(zhǎng)至高密度時(shí)，即須分殖至新的培養(yǎng)瓶中，一般稀釋比例為1：3至1：10，依細(xì)胞種類(lèi)而異。

● 無(wú)菌磷酸生理緩衝液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free, D-PBS, GibcoBRL 21600-010)

● trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA.4Na, GibcoBRL 25300-062)：以10ml分裝于15ml無(wú)菌離心管中，保存于-20℃，使用前放在37℃水槽回溫。

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科

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