信息分類:生物-生命科學(xué)資訊
作者:yiyi發(fā)布
時間:2012-1-19 1:43:33
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正文:
plaque assay詳細的步驟?顯微鏡百科!
1.病毒以漢克緩沖液 (Hank's solution) 做十倍連續(xù)稀釋,由10-1稀釋至10-7。
2.把單層細胞的上清液吸掉后,加上病毒稀釋液0.05 ml,每一稀釋液接種二個洞(well)
并放置在37 ℃溫箱一小時,其間每十五分鐘搖動一次,使病毒可充分與細胞接觸。
3.二倍的Eagles液與二倍高級瓊脂等量溷合,即成一倍的工作液,(Eagles 培養(yǎng)液放在
37 ℃水箱半小時) ,此時溫度約為41℃,每一洞內(nèi)加0.5ml。
4.放37 ℃溫箱培養(yǎng),并含二氧化碳2.5 %。
5.48~96小時,顯微鏡觀察有CPE時,以10% 福馬林固定液一滴加于一個洞中,過夜。
6.固定后之微量盤置于水龍頭下,以水沖掉瓊脂,倒放,使水份流乾。
7.以1 % 結(jié)晶紫染液二滴染色一分鐘,再以自來水沖洗染液,直至無染料洗出為止。
8.自然乾燥后,便顯出無色的不規(guī)則空洞。
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