標題：光學顯微鏡鑒定菌體經酶解后原生質體呈球形
信息分類:站內新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-2-11 0:44:04
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正文:
光學顯微鏡鑒定菌體經酶解后原生質體呈球形
原生質體的鑒定
(1)光學顯微鏡鑒定：菌體經酶解后釋放的原生質體呈球形。
(2)電子顯微鏡觀察：樣品經1％鋨酸蒸氣固定，噴金后掃描電鏡觀
察、拍照。如用透射電鏡，樣品經8 000r／min離心15分鐘，沉淀用2．
5％戊二醛固定2～4小時，磷酸緩沖液沖洗兩次，1％鋨酸固定6—16h，
磷酸緩沖液沖洗，30％一100％酒精逐級脫水，每級
原生質體活力的染色鑒定：采用FDA—PI雙熒光染色法。FDA(熒光
素雙醋酸鹽)是一種非極性化合物，能自由穿過細胞膜，進入細胞質。
如果原生質體保持活性．其細胞質中酯酶活性很高，使FDA分解釋放出
熒光素。這種熒光素有極性．不能穿過細胞膜而積聚在細胞質中。在藍
色激發(fā)光下發(fā)出黃綠色熒光。PI(propidium iodide)不能自由穿透有生
活力的原生質體的細胞膜，但能穿過受損傷的細胞膜進入無生活力的原
生質體。P1在細胞內與核酸結合，在藍色激光下發(fā)出桔黃色熒光。這樣
在同一視野中便可一目了然地區(qū)別出有活力和無活力的原生質體的大致
比例，此方法簡便易行、可靠。
雙向免疫擴散雙向免疫擴散是使抗原和抗體在同一凝膠內彼此相向
擴散，相遇后形成特異的沉淀線(或叫帶)。這種沉淀線對形成它的抗原
和抗體是不可透過的，而對與這種抗原和抗體無關的所有其他抗原和抗
體，則是可透過的。因此，兩種一致的抗原或抗體從兩個不同的孔擴散
，當與從第三個孔擴散的它們的抗體或抗原反應時，彼此將以一定的角
度形成融合的沉淀線。在同樣條件下，兩種無共同決定簇的抗原與它們
的抗體(混合放在第三孔中)反應時，彼此將以一定的角度形成兩條交叉
的沉淀線。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科