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正文:
理論上,對BCM的正確計數(shù)應該是以總紅外陽性計數(shù)減去藍細
菌計數(shù)獲得。但是原綠球藻的存在使得無法確認紅外陽性計數(shù)中的
總藍細菌數(shù)。因為原綠球藻是大洋中豐度最大的藍細菌,他也能夠
被CCD捕獲到紅外
熒光,但其單細胞葉綠素含量較低,其紅色熒光
信號會被海水中共存的聚球藻的強紅色熒光信號所掩蓋,因此在曝
光的最初時間內(nèi)無法被CCD捕獲到。根據(jù)熒光半衰期的原理,當細
胞在激發(fā)光下曝光一段時間后,聚球藻與原綠球藻的紅色熒光強度
差別會縮小,這樣原綠球藻才能夠逐漸與聚球藻同時被CCD捕獲到
。因此,在藍細菌的時間序列成像過程中,準確的總藍細菌(原綠
球藻和聚球藻)數(shù)并不是最初的圖像計數(shù),而是經(jīng)過一段時間曝光
后的計數(shù)。所以,每個視野的BCM的精確計算公式是:BCM細胞數(shù)一
紅外熒光時間序列成像時處于穩(wěn)定期的紅外陽性細胞數(shù)一紅色熒光
時間序列成像時處于穩(wěn)定期的藍細菌細胞數(shù)。TIREM方法對傳統(tǒng)顯
微鏡方法理念是一個沖擊:在傳統(tǒng)的落式熒光顯微法或IREM法中,
為避免熒光淬滅人們往往選擇快速觀察檢測計數(shù);而TIREM方法的
實踐告訴人們,時間序列的觀察是獲得可信數(shù)據(jù)的關鍵。在對BCM
和藍細菌的實驗室純培養(yǎng)的檢測和野外海水樣品的檢測,都驗證了
TIREM法的有效性。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科