標(biāo)題：DNA探針非同位素標(biāo)記,一般熒光素或酶等作標(biāo)記
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-11-13 23:06:00
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正文:
DNA探針非同位素標(biāo)記,一般熒光素或酶等作標(biāo)記
DNA探針的非同位素標(biāo)記法，一般以熒光素、生物素或酶等作標(biāo)記
物。如以生物素直接標(biāo)記，以酶、親和素或熒光作檢測系統(tǒng)。近來
合成的光生物素可直接標(biāo)記，操作比較簡便，價廉安全，5微米的D
NA即可檢出160pg的大腸桿菌DNA，全過程僅需2—3h。也有用數(shù)種
物質(zhì)(如同位素、生物素)同時標(biāo)記在同一個探針上．按不同信號(
顯色、發(fā)光)于同一標(biāo)本中可檢出數(shù)個DNA序列，即應(yīng)用兩枚探針，
其一端標(biāo)以催化劑，另一端為化學(xué)發(fā)光復(fù)合物，以反方向與待測DN
A兩端同時雜交，待二探針逐漸靠攏時，其中催化劑端激發(fā)另一端
的光復(fù)合物而發(fā)出光信號，特異性強，不需固定DNA，也不必清洗
未結(jié)合的標(biāo)記物。除了同位素標(biāo)記、熒光素、生物素標(biāo)記或酶標(biāo)記
外，也有用無標(biāo)記的DNA探針，即以抗原抗體反應(yīng)及酶顯色法為基
礎(chǔ)，先將未標(biāo)記的探針與待檢單鏈DNA片段雜交，再加入非特異抗
雙鏈DNA單克隆抗體(酶標(biāo)抗體)，如二者為互補．即可結(jié)合而顯色
原位雜交條件的控制
普遍認(rèn)為，組織切片厚度并不影響雜交結(jié)果，增加切片厚度并
不能相應(yīng)增加雜交信號，這可能與探針的滲透能力有關(guān)，不論使用
何種探針，雜交前必須對組織進行預(yù)處理，以增強探針對組織的滲
透能力和雜交特異性。預(yù)處理因素中至關(guān)重要的是蛋白酶E或K和胰
蛋白酶對組織的消化。石蠟切片不用蛋白酶消化或消化不充分，常
不能檢出靶DNA，消化過度可導(dǎo)致組織的脫落，因此，酶消化程度
以既能充分打開蛋白質(zhì)外膜，又能保存組織良好形態(tài)，不使DNA因
細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞而丟失。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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