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正文:
酵母菌細胞之制備
取培養(yǎng)盤上少許細胞,將其溶于3.0 mL SD medium-His培養(yǎng)液中,置于軌道震盪器(orbital shaker)上培養(yǎng)隔夜。
取100μL菌液,加上900μL培養(yǎng)液,以
分光光度計波長600 nm (OD600)或顯微鏡測定,估算其細胞個數(shù)
以酵母菌的生物效應(yīng)作為環(huán)境荷爾蒙中雌性激素的偵測指標(biāo)。
試驗將以經(jīng)過基因轉(zhuǎn)殖的酵母菌PL3作
為雌性效應(yīng)的生物測試指標(biāo),以人造雌性荷爾蒙作為試驗的參考物質(zhì),并以
分光光度計與顯微鏡計數(shù)細做比較,
細胞濃度過高均需經(jīng)過稀釋而后上機分析;顯微鏡計數(shù)費時,分光光度計于細胞濃度過低偵測不到,
但較為迅速,推估數(shù)目與顯微鏡推估值相當(dāng)。以分光光度計分析選擇波長600 nm可降低培養(yǎng)液的干擾。
初始細胞濃度過高50000或100000 cell/well,若以96孔盤培養(yǎng),因不易達混合效果,會造成細胞集結(jié)的現(xiàn)象,
造成高估的結(jié)果。人造雌性激素雌二醇與乙基雌二醇對此酵母菌增生試驗,
以乙基雌二醇效果較雌二醇佳,生長速度較快。以乙基雌二醇做測試,
50 ppn即可促進酵母菌PL3增生,反應(yīng)相當(dāng)靈敏
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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