標題：細胞顯微針的制備過程-立體體視顯微鏡廠家
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2013-2-5 11:56:08
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正文:
DNA ES細胞顯微注射針及固定針之制備
材料
1.拉針器（Flaming/Brown Micropipette Puller, Model. P-97, SUTTER INSTRUMENT COMPANY）
2.顯微針燒針器（Microforge, Narishigi Co.）
3.毛細管 (10 公分長，外徑 1.0 mm，內(nèi)徑 0.75 mm)
實驗步驟 I (顯微注射針之制備)
1.將毛細管架于拉針器上。
2.以參數(shù) Heat 321，Pull 80，Velocity 100，Time 100進行拉針。
3.完成之顯微注射針之大小如下圖。
4. DNA顯微注射針以好用為原則，B 值太大易傷害受精卵，太小則開口易阻塞，故使用者仍應(yīng)多次嘗試、調(diào)整最恰當?shù)膮?shù)。
5. 參數(shù)Pull越大，A值越大且B值越��；Velocity越大θ越小。
實驗步驟 II (固定針之制備)
1.將毛細管架于拉針器上。
2.以參數(shù) Heat 321，Pull 80，Velocity 100，Time 100 進行拉針。完成之顯微針大小約如下：
3.將針架至燒針器上。
4.調(diào)整顯微針使在視野下清晰可見，并且維持水平不傾斜。
5.將繞有玻璃球的白金絲移入焦距中，令玻璃球和顯微針皆清晰可見。
6.移動玻璃球，使玻璃球和顯微針接觸，且接觸點在視野焦距中為一切點；又接觸點的針內(nèi)徑恰為
80-120 mm（視野中可見刻度約5格單位大小）。
7.踩踏腳踏板使白金絲加熱（加熱強度約40%~50%），見玻璃球泛紅后，迅速移動顯微針使其和玻璃球
接觸，并于接觸瞬間放開腳踏板，中斷加熱，顯微針會因熱脹冷縮而斷裂。如下所示
8.將斷裂黏于玻璃球上之部份顯微針夾除。
9.移動玻璃球至顯微針正前方。
10.踩踏腳踏板使白金絲加熱（調(diào)整加熱強度約為70%~80%），漸漸靠近顯微針，利用熱源修整顯微針
之斷面至圓滑，且開口內(nèi)徑僅為10 mm左右（視野可見刻度約為1格單位），切記加熱之玻璃球
不可接觸到顯微針
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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