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正文:

環(huán)境污染物對細胞染色體缺失(chromosome aberration)之影響

1、              實驗目標

瞭解環(huán)境污染物造成細胞染色體缺失之影響。

 

2、              實驗原理

染色體存在于細胞核內(nèi)，電子顯微鏡下觀察，可發(fā)現(xiàn)它是由許多彼此相連的染色顆粒(chromomere)所組成。染色體內(nèi)部的物質(zhì)主要為遺傳物質(zhì)去氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)，其次為一種堿性的核蛋白(histone)，二者組成一種複雜的化合物。細胞分裂時，染色體構(gòu)造之型態(tài)與染色體的分離與，筱關細胞週期的正常進行，雖染色體增殖時，其形狀大小亦隨染色體構(gòu)造上的異常可能會自然發(fā)生，但亦會由物理及化學因子誘導而產(chǎn)生，包括了缺失（deletion）、重複（duplication）、倒轉(zhuǎn)（inversion）、異位（translocation）。染色體之異常常與許多遺傳疾病及癌癥相關，因此常用做測試污染毒性物質(zhì)對細胞遺傳毒性之指標。

 

三、實驗流程

1.      種5x10⁵ cells/60mm Dish,10⁶ cells/100mm Dish 于培養(yǎng)皿18小時

2.      加藥Cadmium (0, 0.5, 1, 2 mM )處理24hr后,換新鮮medium收細胞前2小時加入colcemid 0.2 mg/ml,使細胞停在分裂中期(metaphase) colcemid: stock 50 mg/ml in dil. H₂O, dilute with PBS

3.      輕拍培養(yǎng)瓶,搖下細胞,將培養(yǎng)基倒入離心管

4.      以生理食鹽水(PBS)洗一次,再將之倒入離心管

5.      離心800 rpm 4 min 20⁰C

6.      再倒去上清液,輕拍管底以拍散細胞

7.      再以生理食鹽水(PBS)洗培養(yǎng)瓶一次(同步驟5,6,7)

8.      加入5ml 0.5% KCl,靜置6min

9.      離心800 rpm 4 min 20⁰C, 再倒去上清液,輕拍管底以拍散細胞

10.  加入固定液(methanol:acetic acid=3:1,V/V *現(xiàn)配) 離心800 rpm 4 min 20⁰C, 再倒去上清液

11.  重複步驟11, 2次,倒乾拍散

12.  再以固定液稀釋細胞,懸浮液至適當濃度

13.  取一滴,滴在載玻片上

14.  風乾后,用3%吉氏染劑(Giemsa)染15分鐘

15.  以蒸餾水去除染劑,風乾觀察

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科