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正文:
尋找細菌最適合的生長條件!
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本研究的實驗操作時,需注意儘量不要讓培養(yǎng)皿暴露在空氣中,且儘量要在無菌操作臺 內(nèi)操作,才不會有非實驗采樣的細菌污染。
一、制備固態(tài)培養(yǎng)基
根據(jù)維基百科(2009年2月17日)指出:LB培養(yǎng)基,是微
生物學(xué)實驗中最常用的培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)大腸桿菌等細菌。所以我們就采用LB 固態(tài)培養(yǎng)基來做實驗的材料。
(一)實驗材料LB 固態(tài)培養(yǎng)基配方如下(根據(jù)維基百科,2009):
1. 氯化鈉 (NaCl) 10克
2. 蛋白水解物 (tryptone) 10克
3. 酵母抽出物 (yeast extract) 5克
4. 洋菜膠 (agar) 15克
(二)LB 固態(tài)培養(yǎng)基制作步驟:
1. 將上述配方加蒸餾水攪拌溶解。
2. 用氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0。
3. 用量筒定體積至1公升。
4. 移至殺菌釜中121°C高溫殺菌20分鐘。
5. 待溫度降到約60°C,移到無菌操作臺。
6. 再倒入無菌培養(yǎng)皿中讓它凝固。
一公升可制備約40個無菌培養(yǎng)基,共準備80個無菌培養(yǎng)基,保存于4℃冰箱備用。
二、尋找細菌最適合的生長條件:
研究時必須注意實驗安全,在實驗室里有無致病性的大腸桿菌,所以我們才采用這種無致病性的大腸桿菌為這次尋找細菌最適合的溫度和酸堿值的測試對象。
(一)尋找細菌適合生長的溫度:
保存食物的溫度是4°C,培養(yǎng)基經(jīng)過4℃的低溫儲存是否會破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng),影響細菌的生長?一般人體的溫度是37℃,所以我們要看看細菌在37℃的環(huán)境下是否生長的很好?培養(yǎng)基制作的過程中,使用60℃殺菌,60℃是否有殺菌的功能?所以我們共測試三種生長溫度:4℃、 37℃ 、60℃ 。步驟如下:
1. 將0.1 c.c.實驗用無致病性的大腸桿菌(Escherichia coli)平均滴在培養(yǎng)基上,用玻棒涂勻,再分別放入4℃冰箱、37℃與60℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)大約20個小時。
2. 將步驟1.中的4℃的培養(yǎng)皿放入37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天后觀察并紀錄結(jié)果。
3. 將步驟1.中的60℃的培養(yǎng)皿放入37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)二天后觀察并紀錄結(jié)果。
4. 確認37℃是否適合細菌生長的良好溫度。
(二)尋找細菌適合生長的酸堿:
根據(jù)維基百科建議:要將培養(yǎng)皿調(diào)至中性。顯示培養(yǎng)基的酸堿值會影響細菌的生長。所以我們想要檢驗酸堿值到底會不會影響細菌的生長?我們找了鹽酸(HCl, pH = 2.0)、氫氧化鈉(NaOH, pH = 10.0)和中性(pH = 7.0)。步驟如下:
1. 把約0.4 c.c.鹽酸(HCl, pH = 2.0)和約0.4 c.c.氫氧化鈉(NaOH, pH = 10.0)均勻涂抹于無菌培養(yǎng)基中,靜置,等待溶液吸入改變培養(yǎng)基pH值。
2. 分別將0.1 c.c.大腸桿菌用玻棒均勻涂抹于步驟1.調(diào)制的酸性、堿性和中性,放置 37C培養(yǎng)箱培養(yǎng)一天后觀察并紀錄結(jié)果。
3. 確認中性是否適合細菌的生長。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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