點擊查看產(chǎn)品參數(shù)和報價--丨--

--- --- ---

正文:

怎樣做懸浮性細胞的免疫螢光染色?顯微鏡百科！

請問大家一個問題.
假若養(yǎng)懸浮性的細胞 (例如自然殺手細胞,NK cell)
如何把這樣的懸浮性細胞固定在cover slip上之后,然后做IF(免疫染色)

奇怪的是:

1. 細胞都會ㄧ團,然后在顯微鏡下看都沒有焦距
2. 背景有點髒 (有點紅或有點綠)
3. 細胞內(nèi)的目標物都看不到 (我們是在看Perforin)

不曉得根據(jù)以上的步驟,可能會是什么原因呢?

以及,不知道大家都怎么做懸浮性細胞的IF呢?(都是:貼附-固定-染色嗎?)

北京上光儀器：
我們有試過將NK cell貼在poly-lysine coated cover slip (BD)

直接把NK cell加在poly-lysine coated cover slip上,5小時

然后細胞的確會黏上去 (但會ㄧ團一團)

之后照以下步驟去做IF,如下:

1. 用prewarmed PBS洗2次
2. 以3.7% Formalin固定15min
3. 以PBS (含0.2% Triton X-100)打洞,5min x 3次
4. 以blocking buffer (PBS+5% BSA)室溫blocking 1hr
5. 1抗 (1:50 diluted in blocking buffer),室溫1-2hr (或 4度C overnight)
6. 以PBS洗,5min x 3次
7. 2抗 (Cy3-labeled anti-rabbit IgG, 1:100稀釋),室溫45min-1hr
8. 以PBS洗,5min x 3次
9. 然后以正立螢光顯微鏡觀察

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科