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正文:

組織學之染劑染色法教程-生物顯微鏡專業(yè)供應！

 
1.基本步驟：

(1)   fixation：利用共價鍵的生成，讓物質(zhì)的相對位置固定

LM：fomalin的醛基能與一級胺作用

EM：osmium tetraxide：能與雙鍵CC產(chǎn)生cross link

(2)   dehydration：利用alcohol

(3)   embedding：利用parrafin(石蠟)或是plastic resin(樹脂)包埋

(4)   sectioning：利用microtome做切割

(5)   mounting：光學用顯微鏡載玻片，電顯用copper grid

(6)   staining：光學用染劑法；電顯用鉛、鈾等原子序大的金屬，因放出的電子較多能夠增加對比度

2.      染色：

(1) dye染劑染色法

→hematoxylin與eosin：H E染色法

(a)    hematoxylin帶正電，染負電物質(zhì)(ex.核酸)，藍色

(b)   eosin帶負電，染正電物質(zhì)(ex. 蛋白質(zhì)中的Arg , Lys)

→acidic dye：帶負電荷，染basic substance

Basic dye：帶正電荷，染acidic substance

(2) enzyme histochemistry

→利用酵素作用mechanism，給予適當?shù)膕ubstance以偵測該酵素的位置

(3) immunocytochemistry

→設(shè)計抗體辨識特定的物質(zhì)，在利用螢光呈色，標示該物質(zhì)的位置

→依照螢光物質(zhì)接的位置分成direct與indirect兩種

a. direct：primary antibody上有螢光物質(zhì)，直接辨識target

b. indirect：primary antibody辨識target，再加入帶有螢光物質(zhì)的’secondary antibody辨識primary antibody

(4) FISH(fluorescent in situ hybridization)

→加入一段帶有螢光的DNA probe(探針)，會與其互補的DNA，mRNA片段hybridize

→藉此可以偵測特定gene，mRNA的位置(ex,唐氏癥的檢測)

(5) autoradiograph

→利用放射性標定，觀察生化路徑或是標定酵素位置

→加入標定的amino acid，即可觀察細胞中合成蛋白質(zhì)的路徑

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科